Viernes, 21 de septiembre de 2018

SEPTIEMBRE de 2018
Volumen XXXV 
N° 365
ISSN 1852-317X

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abril 2018

Factores pronósticos en carcinoma mamario mixto maligno y carcinoma inflamatorio en caninos.

Vet. Arg. – Vol.  XXXV – Nº 360 – Abril 2018.
Pereira, M*1; Fidanza, M1; Gadea, P1; Gabriele, C1; Micciullo, V1.

Resumen
El cáncer de mama es una enfermedad heterogénea y, por tanto, susceptible de un tratamiento diferente en cada paciente. La elección de la modalidad terapéutica más conveniente en cada caso se basa en el estudio de los factores pronósticos. Los tumores mamarios con altos grados histológicos se asocian con la expresión de altos porcentajes de Ki67,  la sobreexpresión del Herb2-Neu,  la mutación del gen p53 y receptores hormonales negativos (RE – RP) con corta sobrevida global y libre de enfermedad. El grado de malignidad tumoral, se relaciona con disminución  de la actividad de antitrombina (AT) y reacción positiva para dímero D (DD) aumentando el riesgo trombótico. La evaluación de estos factores pronósticos y su posterior incorporación a los estudios realizados a los pacientes caninos con cáncer mamario permitirá adecuar la terapéutica a emplear en cada caso tendiendo a incrementar la sobrevida global y la sobrevida libre de recaídas, permitirá el seguimiento de la reacción al tratamiento y  la objetivación de la progresión de la enfermedad tendiendo a la mejor calidad de vida.
Palabras clave: Tumor mamario, Factores pronósticos, Canino.

Prognostic factors in carcinoma mammary malignant mixed and inflammatory carcinoma in canine.
Summary
Canine mammary neoplasms is a heterogeneous illness and it has different treatment in each patient. The election of it depend the study of prognostic factors. High histological grade in mammary cancer are associated with Ki-67 high level expression, Herb2-Neu overexpression, p53 mutation and negative steroid receptor (ER-PR) with short global survival and disease-free. Tumor malignancy is related to low antithrombin activity (AT) and D-dimer (DD) positive reaction and thrombotic risk. The prognostic factor evaluation and the incorporation of the studies of the canine patients with mammary tumors   will allow to adapt the therapy to use in each case. It will allow to increase the global survival and the free relapse survival time, treatment response evaluation, illness progression looking for the best quality of life.
Keywords:  Mammary tumor, Prognostic factor, Canine.
1Cátedra de Patología Clínica y Enfermedades Médicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA. Chorroarín 280. CP 1427. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. mpereira@fvet.uba.ar

Introducción
El cáncer de glándula mamaria es un padecimiento heterogéneo que requiere de la constante búsqueda e identificación de marcadores que contribuyan a predecir el comportamiento biológico del tumor y a reconocer pacientes con alto riesgo de recurrencia y muerte(1,11). Tanto en Medicina Humana como en Medicina Veterinaria cobran importancia pronóstica la evaluación del estado de los receptores para estrógenos (RE) y progesterona (RP), la sobreexpresión del proto-oncogén Herb2-Neu, el estado del p53, y la expresión del antígeno Ki67 (5,6,10) . Mientras que la presencia de receptores hormonales (RE-RP) se asocia a mayor supervivencia y menores posibilidades de recidivas, la sobre-expresión del proto-oncogen Herb2-Neu se asocia a incrementos en las tasas de proliferación, comportamientos más agresivos, independencia hormonal y, en algunos estudios, aumento de la resistencia a la quimioterapia. (1,5,6) .Estos marcadores y su correlación han sido evidenciados en los adenocarcinomas simples y sus variantes, los carcinomas mixtos malignos y los carcinomas inflamatorios(1,11). La mutación del gen p53 y la expresión de altos porcentajes de Ki67 se asocian a tumores mamarios con altos grados histológicos, elevados índices de proliferación y receptores hormonales negativos con corta sobrevida global y libre de enfermedad(4,5,6). Por otro lado el grado de malignidad tumoral, se asocia con la presencia de sustancias procoagulantes capaces de activar la coagulación directamente o a través de respuestas inflamatorias(3,4). La hipercoagulabilidad puede deberse a la activación de las plaquetas por las propias células tumorales y/o sus productos, por la liberación de sustancias procoagulantes por macrófagos y/o monocitos activados, así como también por alteraciones circulatorias que favorezcan la segregación de sustancias trombogénicas a nivel endotelial desencadenando una coagulación intravascular diseminada (CID)(3,4,7,8,9). El dímero D constituye un factor específico de la actividad fibrinolítica en procesos que producen una excesiva formación de fibrina y es un marcador importante de la progresión tumoral, lo que apoyaría el criterio de la relación entre la activación del mecanismo de la coagulación y de la evolución tumoral (2). La antitrombina (AT) es el inhibidor fisiológico más importante de la coagulación, responsable del 80% de la actividad anticoagulante en la sangre. Inactiva los factores de la coagulación IIa, IXa, Xa, XIIa, calicreinas y plasmina, por lo tanto el descenso de actividad de dicha proteína elevaría el riesgo trombótico (7,8,9).

El objetivo del presente trabajo es reportar la utilidad de incorporar estos parámetros como factores pronósticos para adecuar el tratamiento en pacientes caninos con carcinoma mixto maligno y carcinoma inflamatorio.

Materiales y métodos
Muestras
Se trabajó con 40 pacientes caninos con tumores de mama malignos confirmados por histopatología, provenientes del Servicio de Oncología General de la Facultad de Ciencias Veterinarias-UBA.

Histopatología
Las muestras de tejido mamario fueron fijadas en formalina bufferada al 10% y procesadas por el método histológico convencional, que consiste en la deshidratación en alcoholes ascendentes y su inclusión en parafina. Posteriormente los cortes de 5μm, se tiñeron con Hematoxilina-Eosina.

Inmunohistoquímica
Anticuerpos monoclonales utilizados:
Anticuerpo monoclonal de ratón anti-p53 (clon EP9, Cell Marque, Rockling, CA, USA.)
Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Receptor de estrógeno (RE clon SP1, Cell Marque, Rockling, CA, USA.)
Anticuerpo monoclonal de conejo anti-receptor de progesterona (RP clon Y85, Cell Marque, Rockling, CA, USA.).
Anticuerpo monoclonal de ratón anti-Herb2-Neu (c-erbB-2) (clon CB-11, Cell Marque, Rockling, CA, USA.).
Anticuerpo monoclonal de ratón anti-Ki67 (clon SP6, Cell Marque, Rockling, CA, USA.).

Procesamiento de las muestras:
En primer lugar, las secciones de tejido fueron desparafinadas y rehidratadas. Para la recuperación antigénica se utilizó la técnica Recuperación de Epitopes inducida por calor (HIER) utilizando el reactivo Trilogy de Cell Marque lo que  permitió el desparafinado, rehidratación y recuperación antigénica en forma simultánea. Luego los portaobjetos se lavaron con agua destilada y se incubaron con el anticuerpo primario (dilución 1:100) durante 1 hora a temperatura ambiente, y se lavaron con Tris-solución salina bufferada (TBS). El anticuerpo secundario (Cell Marque, Rockling, CA, USA) se aplicó durante 10 minutos y lavados nuevamente con TBS. El color fue desarrollado a los 5 minutos de incubación con el cromógeno. Por último las muestras fueron deshidratadas y cubiertas con un portaobjetos.

Evaluación de la inmunomarcación:
Las muestras fueron evaluadas simultáneamente por dos observadores, primero a bajo aumento (×40) y luego a gran aumento (x400) para  el recuento. Se evaluaron 3000 células tumorales y se calculó el porcentaje de células con expresión positiva para Ki67, p53, Herb2-Neu y receptores hormonales sobre el total de células tumorales evaluadas. Los resultados se interpretaron según la tabla N° 1.

Hemostasia
Las muestras de sangre fueron obtenidas con citrato de sodio al 3.8 % en tubos plásticos. El plasma pobre en plaquetas se obtuvo mediante una doble centrifugación a 3.500 rpm durante 15 minutos. La determinación de AT se realizó utilizando un test cromogénico (Coamatic Antithrombin, Chromogenix USA) y para el DD un test d aglutinación en latex (Dimertest American Diagnostica, USA).

Análisis estadístico
Las variables en estudios son la expresión positiva o negativa de: p53, receptores hormonales, Herb2-Neu y Ki67; y la alteraciones en los parámetros hemóstaticos: AT y DD. Se realizó un análisis descriptivo de la situación con medidas de posición y con el estudio de las frecuencias de distribución. Se determinó la prevalencia según el tumor (carcinoma mixto maligno y carcinoma inflamatorio). Se analizó la correlación entre los resultados obtenidos de la marcación de p53, receptores hormonales, Herb2-Neu y Ki67 utilizando el coeficiente de correlación de Spearman, considerándose significativos los p menores o iguales a 0,05.

Resultados
Del total (n=40) de muestras histopatológicas de tejido neoplásico mamario canino de tipo maligno, el 12% (n=3/40) presentaron carcinoma mixto maligno y el 8% (n=2/40) carcinoma inflamatorio. En estos pacientes se observó expresión positiva para Herb2-Neu, Ki67, p53 y negativa para receptores hormonales en el total (100%) de casos (n=5/5). También se observó una correlación positiva entre los resultados obtenidos de evaluar la expresión del gen mutante p53, la sobreexpresión de Herb2-Neu y la marcación de Ki67 (p=<0,0001) y una correlación negativa con los resultados obtenidos de la marcación de receptores hormonales (p=0,001). Todos los pacientes evaluados presentaron disminución de la actividad de AT y en cuanto al Dímero D dieron positiva la reacción de aglutinación en látex con una concentración de 200-400ng/ml.

Conclusiones
En concordancia con la bibliografía consultada, se observó en el grupo de pacientes con carcinoma mixto maligno y carcinoma inflamatorio una correlación positiva entre la expresión del gen mutante p53 y la marcación del Ki67, siendo que el gen p53 es un regulador negativo del crecimiento celular y el antígeno Ki67 identifica células proliferantes (5,6). Cuanto mayor es la presencia del antígeno Ki67, más agresivo es el tumor, con mayor invasión vascular, posibilidad de metástasis y complicaciones tromboémbolicas, mientras que la pérdida de la función supresora del gen p53 activa el crecimiento celular aumentando el riesgo de progresión de la neoplasia(4,5,6,8,9,10). La evaluación de estos factores pronósticos y su posterior incorporación a los estudios de rutina en caninos con cáncer mamario permitirá implementar medidas preventivas inherentes al tipo histológico del tumor y adecuar la terapéutica tendiendo a una mejor calidad de vida.

 Bibliografía

  1. Andrea G.; Marko H.; Branka A.; et. al.: Histopathological evaluation and immunohistochemical study of estrogen receptor α, HER-2 and Ki-67 in canine neoplastic mammary lesions. Veternarski arhiv., 81 (6), 709-722, 2011.
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