Sábado, 18 de enero de 2020

ENERO de 2020.
Volumen XXXVIl
N° 381
ISSN 1852-317X

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enero 2020

Solanum stuckertii Bitte, nueva planta tóxica causante de Calcinosis Enzoótica caprina: evaluación experimental de su toxicidad.

Vet. Arg. – Vol.  XXXVII –  Nº 381–  Enero 2020.

Carlos Esteban Rossanigo * 1, Emilio Pablo Parnisari 2, Walter Juan Page 1, Paula Celina Frigerio 2, Ricardo Luis Sager 1

Resumen
La calcinosis enzoótica (CE) es una patología  caracterizada por la deposición de sales de calcio en tejidos blandos, que afecta a los animales en pastoreo, que se ven expuestos a la ingestión crónica de plantas con propiedades calcinogénicas. Estas plantas se componen de vitamina D y sus metabolitos (1,25-dihidroxivitamina D3 (1,25 (OH)2 D3)  o calcitriol, que aumenta la absorción intestinal de calcio. En bovinos de Argentina la intoxicación se la conoce comúnmente como  “enteque seco”, producida por la intoxicación de Solanum glaucophyllum, planta autóctona de la Cuenca del Plata pero ausente en la región semiárida central de nuestro país. Sin embargo ésta enfermedad ha sido diagnosticada con baja morbilidad pero alta letalidad, en varios casos en cabras de la zona serrana de San Luis. La recolección de plantas sospechosas de producir esta intoxicación permitió identificar ejemplares del género Solanum stuckertii Bitter (Ss). Ante la sospecha y la hipótesis que el Ss podría ser el causante de la CE, se llevó a cabo la reproducción experimental sobre el modelo conejo. Los hallazgos macroscópicos e histológicos post-mortem de los animales intoxicados mostraron calcificación en las grandes arterias, pulmones, riñones y piel. Se concluye que el Ss es una nueva planta tóxica para la flora de San Luis, Argentina y América. Estos resultados son los primeros reportes de que ésta maleza induce a la calcinosis enzoótica en cabras y animales experimentales.
Palabras clave: Calcinosis enzoótica, ganado caprino, Solanum stuckertii Bitter, reproducción experimental.

Solanum stuckertii Bitter new toxic plant causing Enzootic calcinosis in goats: experimental evaluation of its toxicity
Summary
Enzootic calcinosis (EC) is a pathology characterized by the deposition of calcium salts in soft tissues, which affects grazing animals, which are exposed to the chronic ingestion of plants with calcinogenic properties. These plants are composed of vitamin D and its metabolites (1,25-dihydroxyvitamin D3 (1,25 (OH) 2 D3) or calcitriol, which increases the intestinal absorption of calcium.  In bovines in Argentina poisoning is commonly known as » enteque seco «, produced by the poisoning of Solanum glaucophyllum, an autochthonous plant of the Plata Basin but absent in the central semiarid region of our country. However this disease has been diagnosed in several cases in goats of the San Luis mountain area with low morbidity but high lethality. The collection of plants suspected of producing this intoxication allowed the identification of specimens of Solanum stuckertii Bitter (Ss). Given the suspicion and the hypothesis that the Ss could be the cause of the EC, experimental reproduction was carried out on the rabbit model. The macroscopic and histological findings of the intoxicated animals showed calcification in the great arteries, lungs, kidneys and skin. It is concluded that the Ss is a new toxic plant for the flora of San Luis, Argentina and America. These results are the first reports that this weed induces enzootic calcinosis in goats and experimental animals.
Key words: Enzootic calcinosis, goat cattle, Solanum stuckertii Bitter, experimental reproduction.
Parte de la información de este trabajo fue previamente presentada en formato de poster en el 18th WAVLD International Symposium of the World Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians (WAVL), 7 al 10 junio de 2017, Sorrento (Italia) y como Tesis de grado para obtener el título de Médico Veterinario de la Facultad de Veterinaria de la UCCuyo sede San Luis del tesista Parnisari E.
(1) Laboratorio en Sanidad Animal. EEA INTA. San Luis. CC 17, (5730), Villa Mercedes (San Luis). (2) Facultad de Veterinaria, Univ. Católica de Cuyo (San Luis).
* e-mail: rossanigo.carlos@inta.gob.ar

Introducción
La calcinosis enzoótica (CE) es una patología  caracterizada por la deposición de sales de calcio en tejidos blandos, que afecta a los animales en pastoreo, en su mayoría bovinos que se ven expuestos a la ingestión crónica de plantas con propiedades calcinogénicas 1-2-3, descripta también en  ovinos 4, porcinos 5, caprinos 4-6 , equinos 4-7 y búfalos 8.  

Esta enfermedad, bien conocida en Argentina, Brasil, Paraguay y Uruguay, ha recibido distintas denominaciones: “enteque ossificans”, “bichoquera”, “guata-í” (del guaraní: caminar corto), “espichamento”, “espichação”, y más corrientemente “enteque seco” 9.

Estas plantas tienen distintos metabolítos de la vitamina D (el 1,25-dihidroxivitamina D3 (1,25 (OH)2 D3)  o calcitriol, que aumenta la absorción intestinal de calcio. Existen diferentes variedades de plantas calcinogénicas que se encuentran distribuidas a nivel mundial 9-10. Hasta el momento se han encontrado seis plantas que inducen calcinosis sistémica por intoxicación crónica: Solanum glaucophyllum (Sg) (synonym: S. malacoxylon) (vulgarmente llamado “duraznillo blanco”), Cestrum diurnum, Solanum torvum, Trisetum flavescens, Nierembergia veitchii y Stenotaphrum secundatum 9-10-11. En bovinos de Argentina la intoxicación se la conoce comúnmente como  “enteque seco”, producida por la intoxicación de Solanum glaucophyllum, siendo considerado como el único agente etiológico de CE en el país. Esta planta es autóctona de la Cuenca del Plata pero ausente en la región semiárido central de nuestro país 11-12.

Sin embrago esta enfermedad ha sido diagnosticada con baja morbilidad pero alta letalidad, en varios casos en cabras de San Luis afectando a animales en pastoreo de zonas serranas ubicadas al norte de la provincia 13-14. Los primeros antecedentes fueron reportadas por Iglesias y col. (2008) en el Departamento Chacabuco, en proximidades del faldeo de Los Comechingones con una morbilidad de cabras adultas aproximada del 12% y con una letalidad del 100% de un total de 830 animales. Años más tarde Rodríguez y col. (2013) comunican la presentación de otro caso de CE en el otoño/invierno del 2012 en un establecimiento en el paraje “Quebrada San Vicente”, Departamento San Martín, en donde sobre un total de 160 animales murieron 60. En ambos casos la deposición de sales de calcio en tejidos blandos, se acompaña de un severo deterioro físico y problemas articulares.

Este publicación tiene como objetivo reportar un nuevo caso en el mismo establecimiento y determinar los efectos del Solanum stuckertii Bitter (Ss) Ss como presunto vegetal calcinogénico, mediante la administración de diferentes dosis de soluciones acuosas de hojas en un modelo experimental en conejos.

Materiales y métodos
Caso clínico
El caso se presentó en un establecimiento caprino localizado en la Quebrada de san Vicente (Departamento San Martín) (latitud s 52° 23¨ y longitud oeste 23° 12¨) 15. El sistema era extensivo sobre pastizal natural serrano y monte, con una majada compuesta de 60 cabras y 3 machos base criolla-Anglo Nubian. Durante el 2016 se presentaron cabras con sintomatología típica de calcinosis con una morbilidad del 17% y 100% de mortalidad. Se realizaron exámenes clínicos, y necropsias a los animales afectados para la obtención de sangre y tejidos que fueron procesados para la determinación de la calcemia por espectrofotometría de absorción atómica y estudios histopatológicos.

Recolección e identificación del presento vegetal calcinogénico
Durante la jornada de campo se recolectaron ejemplares de las principales plantas no forrajeras presentes en el establecimiento con el objetivo de reconocer algunas de ellas como posible agente etiológico de esta enfermedad, identificando a ejemplares del género Solanum spp. como presunto vegetal calcinogénico. La identificación taxonómica de los especímenes fue realizada en el Departamento de Ciencias Naturales de la Universidad Nacional de Río Cuarto 16.

Reproducción experimental in vivo
Ejemplares de Ss, recolectadas en cantidad en diciembre del 2016 en el establecimiento problema, se dejaron secar sobre papel, para facilitar la pérdida de humedad. Cuando las hojas se tornaron crocantes se molieron con la mano y la ayuda de un mortero, para ser posteriormente envasadas en recipientes de plástico con tapa.

Para la intoxicación experimental se emplearon 8 conejos mestizos de ambos sexos adultos de 2 a 3 kilos de peso vivo, clínicamente sanos. Se alojaron en jaulas individuales, donde recibieron alimento balanceado comercial y agua ad libitum. Anteriormente pasaron por un período de adaptación de 30 días, para luego dar lugar al período de intoxicación

Para la intoxicación de los conejos se procedió de acuerdo con el método descripto por Gomar (2006) 12, con pocas modificaciones. Se utilizaron tres grupos distribuidos al azar:

  • Grupo A (GA) de 3 conejos: intoxicados con 250 mg/kg/día de Ss.
  • Grupo B (GB) de 3 conejos: intoxicados con 500 mg/kg/día de
  • Grupo C (GC) control o testigo de 2 conejos sin la dosis de la planta tóxica.

Los animales intoxicados recibieron diariamente un extracto acuoso de Ss (hojas molidas diluidas en 3 ml de agua destilada durante 24 horas), por vía oral mediante una jeringa. Los animales controles fueron manipulados de la misma manera que los experimentales, aunque sólo recibieron agua. El periodo de intoxicación se desarrolló por un lapso de 21 días, durante los cuales los grupos A y B recibieron la dosis tóxica. Posteriormente a este período, los animales que sobrevivieron fueron sacrificados mediante la inhalación de éter.

Todos los animales fueron pesados antes y durante la experiencia. Diariamente se registraba de manera individual el consumo de alimento, la presencia de diarrea, la fecha de deceso en el caso de animales muertos y cualquier otro signo que llamase la atención, especialmente en los animales intoxicados.

Previamente como posterior al periodo de intoxicación se tomaron imágenes de rayos X a todos los animales de los tres grupos utilizando un equipo de rayos Phillips Practix, modelo NR21836/00 con procesado digital. Ambas tomas fueron en posición latero-lateral y dorso-ventral con el fin de realizar una comparación entre las imágenes para determinar la presencia de calcificaciones a nivel articular y óseo.

Se tomaron muestras de sangre con la finalidad de observar los diferentes niveles de calcemia durante el procedimiento de intoxicación. Se realizaron 4 extracciones a todos los grupos con un lapso de tiempo de 7 días para cada una (día: 0, 7, 14, 21). Los conejos fueron inmovilizados por sujeción manual y la extracción de sangre se realizó de la vena safena lateral (rama craneal) de los miembros posteriores. Los valores individuales de calcio (Ca mg/%), se determinaron por espectrofotometría de absorción atómica (Perkin Elmer modelo 2380) Se tomó como referencia de concentración normal de calcio en conejos sanos a los guarismo aportados por Nouaille y col., (1994) 17: 10,6 a 18,6% mg/%.

De todos los animales muertos durante el ensayo y de aquellos sacrificados al finalizar el mismo se les realizó una necropsia minuciosa haciendo mayor hincapié en las lesiones calcigénicas. Se registraron individualmente las lesiones macroscópicas y se tomaron muestras de los tejidos dañados (corazón, aorta torácica y abdominal, pulmones, hígado, riñón y piel), los que fueron fijados en formol al 10%, y posteriormente incluidos en parafina. Se realizaron cortes histopatológicos coloreados con hematoxilina-eosina.

Los pesos de los animales y el consumo de alimento obtenidos en cada grupo fueron comparados estadísticamente utilizando el análisis de varianza y el test de comparación de Tukey por medio del Software estadístico Infostat/P 2013.

Resultados
Caso clínico
En la visita al establecimiento se detectó una cabra clínicamente afectada con dificultades en la locomoción con pasos rígidos y cortos en distancias muy cortas, con un avanzado estado de caquexia, pobre condición corporal, con deformaciones duras y depilación de la articulación femorotibial derecha (Foto 1) y atrofia muscular del miembro.

Foto 1: Calcificación de articulación de la rodilla (Art. femorotibiorotuliana). Rayos X con osteoesclerosis.

A la necropsia se observó calcificaciones extensas de los lóbulos apicales y cardíacos de ambos pulmones (Foto 2), en los tendones y ligamentos de la articulación femorotibial y en grandes vasos (aorta ascendente y arco aórtico, aorta descendente torácica y abdominal, carótidas, arterias mesentéricas e iliacas) (Foto3). La superficie endotelial de todas estas arterias se presentaba rugosa y áspera. Los demás órganos sin lesiones aparentes. Se extrajo sangre del animal enfermo y se tomaron muestras de tejidos afectados para la realización de cortes histológicos.

Foto 2: Calcificación del lóbulo apical y cardíaco de pulmón.

Foto 3: Calcificaciones en la superficie endotelial de los grandes vasos (flechas).

Las lesiones histológicas de las arterias afectadas mostraban calcificaciones en la capa media y proliferación conjuntiva subendotelial.  En pulmones se hallaron depósitos de calcio en forma de pequeños gránulos sobre las fibras elásticas y tabiques interalveolares. La determinación del Ca sérico revelo un valor de 18,4 mg/% (rango de referencia en caprinos 8 a 11,5 mg/%).
Recolección e identificación del presento vegetal calcinogénico
La recolección de plantas presentes al costado de arroyos y vertientes permitió identificar ejemplares del género Solanum stuckertii Bitter como posible agente etiológico de esta enfermedad (Foto  4).

Foto 4. Solanum stuckertii Bitter.

Vulgarmente en Argentina se lo conoce con “Bolillos del perro”, “Comida de víbora”, “Duraznillo” o como “Hediondillo negro”. En Bolivia los nombres locales “Malva” y “Pereremi grande” 18. Se trata de un arbusto de 0,3-3 m de alto, con tallos moderadamente a densamente pubescentes. Sus hojas son simples con 6 o más por unidad simpodial, inflorescencia simple o bifurcada con corola estrellada blanca (más raro violácea) y anteras generalmente amarillas elipsoides. Los frutos tienen 1-3 cm de largo, 1-3 cm de diámetro, globosos, obtuso en el ápice, glabro, de color naranja a rojizo cuando está maduro. Fenológicamente se colectan en flor desde octubre hasta mayo y con frutos en octubre hasta agosto.

Se encuentra distribuido en los Andes del sur de Argentina (Catamarca, Córdoba, Jujuy, La Rioja, Salta, San Luis, Santiago del Estero y Tucumán) en forma aislada o en matorrales en claros del monte o bosques abiertos a menudo en las orillas de arroyos, en áreas relativamente secas de aproximadamente 250-2000 m. de altura 18. También se han recolectado especímenes en Bolivia en áreas bajas al este de las laderas andinas y en el bosque del Chaco 18.

Seguimiento de la clínica de los animales (Sintomatología)
Los principales signos de los animales experimentales se muestran en la tabla 1. Los animales intoxicados pertenecientes a ambos grupos mostraron signos de anorexia aproximadamente a las 12 horas del comienzo de la intoxicación. Algunos comenzaron con diarrea y astenia (decaimiento) a partir de las 24 horas post-primera intoxicación. La mayoría de los conejos de los grupos intoxicados no completaron los 21 días del ensayo debido al mal estado generalizado ocasionado por los síntomas mencionados anteriormente que le provocaron la muerte. De los tres animales del GA el N° 6 murió a la segunda semana, el N° 5 a la tercera y el N° 2 se mantuvo con vida los 21 días cuando fue eutanasiado. Del GB el conejo N° 4 murió a la primera semana, el N° 8 a la segunda semana y el N° 7 se mantuvo con vida sacrificándose el día 21 del experimento. Los animales del GC grupo control no presentaron sintomatología durante todo el transcurso del ensayo y permanecieron con vida al cabo de los 21 días de la reproducción experimental.

Todos los individuos experimentales sufrieron pérdida de peso y condición corporal notoria. En la figura 5 se observa la evolución del peso vivo promedio de cada grupo durante el transcurso del ensayo.

Figura 5: Evolución media del peso vivo de cada grupo. * Diferencias
significativas en las medias de las variables bajo estudio (p < 0,05).

El análisis estadístico del peso vivo demostró que el grupo control testigo ganó significativamente más peso (p < 0,05) a partir de la 2da semana que los grupos GA y GB intoxicados con diferentes dosis de Ss.
El consumo de alimento de los tres grupos experimentales se observa en la figura 6. Al cabo de los 21 días el grupo GC Testigo consumió significativamente más alimento (p < 0,05) que los grupos GA y GB intoxicados con Ss. Cabe aclarar en el consumo de los últimos cuatro días del grupo GB corresponde a la medición de un solo sobreviviente.

Figura 6: Evolución media del consumo de alimento de los
grupos experimentales.

Toma de imágenes rayos X (Rx)
En el análisis de las imágenes radiográficas de uno de los conejos del Grupo A y dos del Grupo B, solo se observaron en ambos planos varios puntos amorfos de diferentes tamaños distribuidos en abdomen y tórax que podrían corresponder a calcificaciones de piel, ya que coinciden con las palpaciones. Los conejos del Grupo control no manifestaron cambios.

Calcemia
La figura 7 muestra la evolución de la calcemia de cada grupo estudiado.  La calcemia de los grupos intoxicados aumentó luego de recibir la primera dosis del extracto acuoso de Ss, manteniéndose alto hasta el final del ensayo. Los valores fueron similares entre los grupos intoxicados pero estadísticamente diferente (p < 0,05) al grupo testigo o control.

Figura 7: Evolución de la calcemia media de los grupos experimentales.
Signos diferentes determinan diferencias significativas en las medias (p < 0,05).3era semana: no hay datos disponibles para anova (datos individuales de animales sobrevivientes).

Hallazgos macroscópicos post-mortem
A simple vista se pudo detectar, en un principio de la necropsia, la escasa grasa corporal presente en los sujetos expuestos a la administración de Ss. La Tabla 2 muestra las alteraciones macroscópicas halladas, indicando en cada caso, la cantidad de días que fueron expuestos a la ingestión de Ss.
Las lesiones de calcificaciones de piel se detectaron al tacto de la superficie corporal como pequeños engrosamientos duros de diferentes tamaños que se desplazaban con el pelaje sobre el cuerpo del animal.

En aorta se observaron focos blanquecinos compatibles con depósitos de calcio en la superficie interna, de tamaño y distribución variables, los cuales se podían visualizar desde el exterior junto a un agrandamiento que al tacto tenían una consistencia rígida. En la inspección de la superficie interna de las aortas se las encontró con sus paredes rugosas al tacto, engrosadas, con presencia de focos de asperezas, y relieves a lo largo del vaso durante la palpación (Foto 5)

Foto 5: Pared interna de la aorta ascendente con depósitos de calcio

En los riñones afectados se observaron depósitos blanco-grisáceos a lo largo de la profundidad de la corteza renal y en la zona limítrofe entre corteza y médula, los cuales al tacto se notaban ásperos (Foto 6).

Foto 6: Riñón con depósito de calcio en corteza y en la zona entre corteza y médula.

En dos conejos de ambos grupos fue posible detectar áreas muy pequeñas de calcificación del tamaño de una cabeza de alfiler en el parénquima de los pulmones, pero nunca se observaron depósitos de calcio hígados y deformaciones articulares en los animales intoxicados. En ambos animales del Grupo C (GC) no se observaron particularidades y se pudo establecer la comparación con los hallazgos de los conejos intoxicados (Foto 7).

Foto 7: Comparación de la superficie interna de la aorta de un animal intoxicado (arriba) con la de una del grupo control (ab).

Hallazgos microscópicos post-mortem (Tinción con hematoxilina y eosina)
Tanto los cortes longitudinales como transversales de la aorta torácica mostraron masiva mineralización (calcificaciones) con cristales amorfos en la capa media e íntima con fragmentación de fibras elásticas, sin proliferación de tejido conjuntivo ni inflamatorio (Foto 8).

Foto 8: Sección transversal de arteria aorta con calcificación (x400).

Los riñones presentan dos zonas bien marcadas de mineralización con cristales amorfos basófilos; en corteza y en la zona de transición entre corteza y médula. En corteza los cristales se depositan principalmente sobre la cápsula de Bowman, sobre la pared de los tubos contorneados proximales con un granulado fino y en la luz de los tubos como cristales amorfos grandes y acelulares. En la transición entre corteza y médula los depósitos observados son longitudinales sobre y dentro de las asas de Henle (Foto 9).

Foto 9: Sección de riñón con calcificaciones en corteza y en la zona de transición entre corteza y médula (x10).

Los cortes de piel mostraron la epidermis muy delgada con escasa presencia de queratina. En la dermis se observa abundante mineralización de cristales amorfos y de variable tamaño en proximidad y a mayor profundidad que los folículos pilosos y glándulas sebáceas. La mineralización se produce sobre las fibras conjuntivas sin generar encapsulamiento o reacción inflamatoria (Foto 10).

Foto 10: Sección de piel: dermis con abundante mineralización de cristales amorfos (x160).

En los pulmones se observó depósitos minerales amorfos compatibles con calcio en la íntima de las grandes arterias de pulmón y sobre todo en las paredes alveolares destruyendo el epitelio y la estructura alveolar (Foto 11).

Foto 11: Sección de pulmón: depósitos minerales amorfos en grandes arterias (flechas rojas) y en las paredes alveolares (flechas negras) (x 140).

En bronquiolos se observan depósitos de mineral en su lámina propia junto con células de descamación, condrocitos mineralizados y células gigantes multinucleadas en el epitelio bronquiolar en las áreas de calcificación (Foto 12).

Foto 12: Sección de bronquiolo: depósitos de mineral en la lámina propia (Flecha roja) (x 140). Condrocitos mineralizados (Flecha negra) y células gigantes multinucleadas en el epitelio bronquiolar en las áreas de calcificación. (Flecha azul) (x 1200).

No se observaron lesiones y depósitos minerales, solo una gran congestión hepática.

Discusión
El modelo conejo como animal de reproducción experimental utilizado previamente por otros autores 12-19 se mostró como válido y adecuado para comprobar la toxicidad del Solanum stuckertii Bitter.

La pérdida de peso, la anorexia y la astenia fueron signos reportados en distintas especies afectados de CE por una numerosa cantidad de investigadores 8-9 y también descriptas en reproducciones experimentales 12-19, destacando una marcada disminución de la condición corporal, que junto a la presencia de diarrea, coinciden con los síntomas observados durante esta experiencia. Según Zanuzzi (2010), los cambios en la diferenciación, proliferación y muerte celular en el intestino podrían explicar la diarrea y adelgazamiento que manifestaron los animales intoxicados.

En los conejos intoxicados se manifestaron guarismos elevados de calcio en sangre en comparación con los del grupo control. Estos elevados valores de calcemia coinciden con los valores reportados por Nouaille et al., (1994) en animales afectados por una calcificación de la aorta, mientras que la calcemia del grupo control se mantuvo dentro del rango de los valores reportados para animales sanos.

La presencia de calcificaciones de diversos tamaños en piel detectables a la palpación discrepan de las que se dieron en el ensayo de Gomar (2006) el cual no observó particularidades macroscópicas en piel, sin embargo coincide el punto de vista microscópico a través de los cortes histopatológicos con tinción hematoxilina.

La calcificación de grandes vasos como la aorta es una característica que se hace presente en los casos clínicos de CE tanto en bovinos, caprinos, como en los conejos utilizados por diferentes autores para la reproducción de la enfermedad. En el trabajo se observa la presencia de depósitos de calcio en las paredes internas de las aortas de conejos intoxicados lo que coincide con los hallazgos de otros autores 6-9-10-12, al igual que la descripción de la acumulación de cristales amorfos en las capas media e íntima junto a alteraciones en las fibras elásticas que se observan en los cortes teñidos con hematoxilina y eosina.

En riñones, se encontraron depósitos de color blanquecino en la corteza y en la zona de transición entre corteza y médula similares a los que se describieron en los riñones de bovinos y conejos de otros trabajos bajo el efecto de Sg 3-12, que al microscopio presento zonas de acumulación de cristales al igual que los conejos intoxicados con Ss.

La técnica histopatológica utilizada en los diferentes tejidos permitió probar la presencia de depósitos de cristales sin forma definida compatible con calcificaciones al igual que otros autores 6-9-12.  Barros et al. (1981) 20 fueron los primeros en comunicar la existencia de células gigantes multinucleadas en la aortas y en los pulmones de animales intoxicados con plantas calcinogénicas. Estudios in vitro han demostrado que el 1,25(OH) 2D3 induce la diferenciación de monocitos a macrófagos y su posterior fusión para formar células gigantes similares a osteoclastos. En el estudio de Gomar (2006) se observaron macrófagos y células gigantes multinucleadas, principalmente en los pulmones. La presencia de células multinucleadas, similares a los osteoclastos, obedecería a la acción de 1,25(OH) 2D3 presente en las hojas de Sg.

Las lesiones microscópicas encontradas en los pulmones coinciden con las observaciones realizadas en reproducciones experimentales con conejos intoxicados con Sg 12, tanto por las calcificaciones de vasos, paredes alveolares, bronquiolos, condrocitos mineralizados, sino también por la presentación de macrófagos y células gigantes multinucleadas en el epitelio bronquiolar en las áreas de calcificación.

No se encontraron reportes bibliográficos que describan depósitos de Ca en el hígado de los animales intoxicados como sucedió en el presente estudio.

En este trabajo no se hallaron particularidades macroscópicas que indiquen calcificación en articulaciones al igual que los otros trabajos experimentales con intoxicación de corto plazo 12, a diferencia con intoxicación naturales a largo plazo donde la osteoesclerosis y la calcificación de articulaciones, especialmente de la rodilla (articulación femorotibiorotuliana) son siempre descriptas 13-14-15.

Las imágenes de rayos x no evidenciaron lesiones articulares, quizás debido a que la intoxicación fue de corto plazo. En los animales del Grupo control no se observaron signos y lesiones por lo que se pudo establecer la comparación con los hallazgos de los conejos intoxicados.

Luego del análisis de los resultados obtenidos en esta reproducción experimental se concluyó que el Solanum stuckertii Bitter es nueva planta tóxica para la flora de San Luis, Argentina y América, ya que no hay reportes en la bibliografía y que estos resultados son los primeros reportes de que esta la maleza induce a la Calcinosis enzoótica en cabras y animales experimentales. La hipótesis es comprobada debido a que los individuos intoxicados con Solanum stuckertii Bitter presentaron sintomatología característica de la calcinosis enzoótica y tanto los hallazgos post-mortem como los de laboratorio coinciden con los observados en los caprinos del relato.

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