Vet. Arg. - Vol. XXIX - Nº 286 - Febrero 2012.
Prado, A.¹; Bernardi, S.¹; Bassi, A.² y Marini, P.R.²

Resumen.
El objetivo del presente trabajo fue probar la utilidad de tres técnicas para la observación de la cristalización del moco cervical en vacas lecheras y, en base a ello, determinar si hay diferencias en la arborización a lo largo de los muestreos. Se utilizaron cinco vacas Holando Argentino, multíparas, clínicamente sanas, pertenecientes al tambo de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNR, entre los 30 y 50 días post parto. Se tomaron las muestras de moco cervico-vaginal a través de una palpación vaginal a los 0, 7, 14 y 21 días de iniciado el muestreo con tres formas diferentes de recolección. De las técnicas utilizadas, solamente las dos primeras nos aportaron resultados satisfactorios, la tercera metodología no fue de utilidad, probablemente debido a que, la presión ejercida sobre la muestra, rompe el entramado característico del moco. En todas las muestras se observó la organización típica en hojas de helecho, sin embargo, en algunas preparaciones las hojas eran finas, largas y ramificadas, mientras que en otras eran mas cortas, sin ramificaciones, con nervaduras mas engrosadas y en algunos casos acompañadas de células epiteliales y neutrófilos. Estas diferencias, según estudios anteriores, podrían estar relacionadas al predominio de estrógeno y progesterona propio del ciclo estral. Se concluye que la técnica que mejor se adaptó para observar la cristalización del moco cérvico-vaginal fueron las dos primeras (improntas), poniendo de manifiesto diferencias en las características particulares de la arborización.

Study on the crystalization of cervical mucus in milky cows.
Summary.
The aim of this work was to test the usefulness of three different techniques applied for the observation of the crystalization of cervical mucus in milky cows and, based on that, to determine whether there are differences in the arborization throughout the sampling. Five Hosltein cows were used, all of which were: multiparous, clinically healthy and belonging to the farm of the Faculty of Veterinarian Sciences of the University of Rosario, between 30 and 40 days after delivery. Samples of the cervical-vaginal mucus were taken through vaginal palpation during day 0, 7, 14 and 21 of the sampling using three different methods of gathering. Of all the techniques used, only the first two ones offered satisfactory results, the third technique proved to be useless, probably due to the fact that the pressure made on the sample breaks the characteristic layout of the mucus. In all the samples it was observed the typical organization in fern leaves. However, in some preparations the leaves were thin, long and ramified, while in others they were shorter, with no ramifications, with thicker ribs and in some cases with epithelial cells and neutrophils. These differences, according to previous studies, could be related to the predominance of oestrogen and progesterone typical of the estral cycle. It is concluded that the technique which best adapted to the observation of the crystalization of cervical-vaginal mucus were the two first ones (marks), which highlighted differences within the particular characteristics of arborization.
¹Cátedra de Histología I y Embriología Básica. ²Cátedra de Bovinos Lecheros. Facultad de Ciencias Veterinarias-Universidad Nacional de Rosario, Argentina.

Introducción.
La alta productividad está acompañada por una disminución global de la eficiencia reproductiva del rodeo lechero (capacidad para producir un ternero vivo). Este antagonismo es muy notorio en los sistemas intensivos o free stall , y se observa una tendencia creciente en los sistemas a pastoreo con suplementación desarrollados en la región pampeana, provocando un alargamiento del intervalo parto-concepción (Marini y col., 2008; Marini y col., 2007).
La falla en las vacas lecheras para quedar gestantes después de repetidas inseminaciones artificiales (IA) es causa de pérdidas económicas. Esta situación se debe a múltiples factores, entre ellos la composición del moco cervical (MC). Numerosos trabajos han demostrado una fuerte interacción entre éste y el espermatozoide. Además, sus propiedades influyen en el movimiento espermático individual, aun cuando el espermatozoide pueda evitar el cérvix como es el caso de la IA (Gaddum-Rosse y Lee, 1978; Gaddum y col., 1980; Youseff 1981; Charcoy Acevedo, 2001; Fordney-Settlage, 1981). Una de las propiedades biofísicas del mucus es la cristalización (formación de helechos), la cual permite la detección del celo y juega un papel importante sobre la motilidad espermática (Fordney-Settlage, 1981; Gaddum-Rosse y Lee, 1978).
En vacas lecheras los porcentajes de concepción se elevan considerablemente cuando el patrón de cristalización del MC, debido al contenido de cloruro de Na+ y K+, está por encima del grado 3 (el mismo corresponde a los grados 1 y 2 de la clasificación propuesta por Jaramillo,1991). Los estrógenos inducen a la formación de cristales, mientras que la progesterona reduce la incidencia de su formación (Tsiligianni et. al. 2000, 2001).
La habilidad que tiene el MC de permitir a los espermatozoides penetrar en él se menciona como receptividad y se han desarrollado técnicas al respecto para medir la motilidad de los espermatozoides en un período de tiempo específico (OMS, 1987). Akhtar y col. (1980), reportaron que en moco fino ó intermedio la distancia recorrida por segundo fue de 20 a 29 micras y en el moco espeso de 10 a 20 micras por segundo, siendo la mejor viabilidad espermática a la mitad o al final del estro. Estas variaciones en la viscosidad del moco cervical están en relación con los constituyentes químicos del mismo y además con el pH.
A su vez, la migración espermática puede estar influenciada por la secreción de inmunoglobulinas en el cérvix, una reducida penetración espermática en el moco cervical está significativamente asociada con altos títulos de anticuerpos contra espermatozoides en el suero (Menge y col., 1982).
Friedman (1991) describe que la IA es un factor de riesgo para la inducción de la formación de anticuerpos contra espermatozoides en el cérvix, y es precisamente esta práctica la más utilizada en el manejo reproductivo de los hatos lecheros. Zaaijer y col., (1993) demostraron que los tratamientos hormonales inducen cambios en la composición del MC en distintas especies animales (cerdos, conejos, etc.), entonces la composición de esta secreción uterina puede ser usada como otro indicador más de la eficiencia reproductiva.
Objetivo.
El objetivo del presente trabajo fue probar la utilidad de tres técnicas para la observación de la cristalización del moco cervical en vacas lecheras y, en base a ello, determinar si hay diferencias en la arborización a lo largo de los muestreos
Materiales y métodos.
Se utilizaron cinco vacas Holando Argentino, multíparas, clínicamente sanas, pertenecientes al tambo de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNR, entre los 30 y 50 días post parto del año 2011, el mismo posee 70 vacas en ordeñe con un promedio diario de 24 litros por vaca.
La alimentación se basó en pastoreo de alfalfa con diferentes niveles de suplementación: balanceado comercial, silo de maíz y rollos de alfalfa.
Sobre cada animal se procedió primeramente al lavado de la zona perineal con agua y desinfectante (amonio cuaternario). Luego se tomaron las muestras de moco cervico-vaginal a través de una palpación vaginal a los 0, 7, 14 y 21 días de iniciado el muestreo. Con lo recolectado se procedió de tres formas diferentes: 1) colocando un portaobjetos sobre el flujo recolectado y presionando firmemente (impronta 1), 2) se dejó caer la gota de flujo sobre el portaobjetos, y una vez que contactaron ambos, se procedió a esparcirlo, esto se realizo varias veces sobre el mismo portaobjetos (impronta 2) y 3) se colocó una gota de moco sobre una esquina del portaobjetos y se extendió la misma con otro portaobjetos en ángulo de 45º hasta obtener una lámina fina de muestra. Las preparaciones así obtenidas se secaron al aire por el término de 1 hora y se observaron bajo microscopio óptico Leica DM750 a diferentes aumentos (4x, 10x, 40x). Las fotografías fueron tomadas con cámara Leica EC3 incorporada al microscopio antes mencionado.

Resultados.
De las técnicas utilizadas, solamente las dos primeras nos aportaron resultados satisfactorios, la tercera metodología no fue de utilidad, probablemente debido a que, la presión ejercida sobre la muestra, rompe el entramado característico del moco. En todas las muestras se observó la organización típica en hojas de helecho, sin embargo, en algunas preparaciones las hojas eran finas, largas y ramificadas (Foto 1 y 2), mientras que en otras eran mas cortas, sin ramificaciones, con nervaduras mas engrosadas (Foto 3) y en algunos casos acompañadas de células epiteliales y neutrófilos. Estas diferencias, según estudios anteriores, podrían estar relacionadas al predominio de estrógeno y progesterona propio del ciclo estral.
(Imágenes 1, 2 y 3: en anexo).
Conclusión.
En conclusión, la técnica que mejor se adaptó para observar la cristalización del moco cervico-vaginal fueron las dos primeras (improntas), poniendo de manifiesto diferencias en las características particulares de la arborización. No obstante, estos resultados deben considerarse preliminares y será necesario profundizar el estudio a fin de relacionar las mencionadas diferencias en la arborización con la etapa del ciclo estral que curse la hembra.
Bibliografía
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Charcoy Acevedo M.J. Participación de algunas propiedades físico-químicas del moco cervical en el síndrome de las vacas repetidora. Tesis de Maestría. 84. 2001.
Fordney-Settlage, D. A review of cervical mucus and sperm interactions in humans. Int. J. Fertil. 26:161-169. 1981
Friedman, A.J., Janeau-Norcross, M., Sedensky, B. (1991). Antisperm antibody production following intrauterine insemination. Hum. Reprod. 6(8): 1125-8.
Gaddum-Rosse, P y Lee, W.I. Sperm motility in cervical mucus a comparative study. Anat. Rec. 190:593. 1978
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Marini ,P.R., Charmandarian, A., y Di Masso, J.R. (2008). Comportamiento de variables productivas y reproductivas de vacas lecheras en sistemas a pastoreo. Jornadas de divulgación técnico-científicas. Facultad de Ciencias Veterinarias – UNR p.143-144
Menge, A.C., Medley, N.E., Mangione, C.M., Dietrich, J.W. (1982). The incidence and influence of antisperm antibodies in infertile human couples on sperm-cervical mucus interaction and subsequent fertility. Fertil. Steril. 38 (4): 439-446.
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Tsigliani, Th., Karagiannidis, A., Brikas, P., Saratsis, Ph. (2000). Physical properties of bovine cervical mucus during normal and induced ( Progesterone and/or PGF2α) estrus. Theriogenology 55: 629-640.
Zaaijer, D., Counotte, G.H.M., Sol, J., Smitd, W.J., Broadbent, P.J. (1993). Changes in the composition of cervical mucus of the cow during the estrous cycle as parameters for predicting potential fertility. Theriogenology 39: 569-580.