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diciembre 2014

Diagnóstico histopatológico y su relación con la expresión del oncogén Her2-neu en cáncer mamario canino.

Vet. Arg. – Vol.  XXXI –  Nº  320 –  Diciembre 2014.
Pereira, Marcela1; Mantica, Florencia1; Fidanza, Mercedes1; Gonzalez, Sebastián1; Artese, Joaquín2; Baratzabal, Florencia2; Mira, Graciela1.

Resumen
El cáncer de mama representa en caninos el 42% de todos los tumores en esa especie. Un correcto diagnóstico histopatológico es de utilidad para evaluar pronóstico y plantear estrategias terapéuticas a seguir. Se ha demostrado que el pronóstico está estrechamente correlacionado con el nivel de diferenciación. Por ello los tumores malignos con mejor pronóstico son los adenocarcinomas complejos que presentan una estructura glandular altamente diferenciada  mientras que los menos diferenciados con aspecto de tejido heterogéneo desorganizado son mucho más malignos y  se conocen como anaplásicos con gran tendencia a invadir vasos linfáticos y sanguíneos(5-6). A esto se suma en Medicina Humana la incorporación de marcadores tumorales  que permiten una mejor comprensión de la biología del cáncer de mama y con valor pronóstico y predictivo de respuesta a la terapia(3-7-11). Entre estos se destaca la sobre-expresión del proto-oncogen Her2-neu que se asocia a incrementos en las tasas de proliferación, comportamientos más agresivos, independencia hormonal y, en algunos estudios, aumento de la resistencia a determinados agentes quimioterápicos(1-2-9). La evaluación de estos factores pronósticos y su posterior incorporación a los estudios realizados a los pacientes caninos con cáncer mamario permitirá adecuar la terapéutica a emplear en cada caso tendiendo a incrementar la sobrevida global, permitirá el seguimiento de la reacción al tratamiento y  la objetivación de la progresión de la enfermedad tendiendo a la mejor calidad de vida(4).

Palabras clave: factores  pronóstico, oncogen Her2-neu, cáncer mamario canino

Histopathological diagnosis and its relationship with oncogene Her2-neu in canine mammary tumors.

Summary
Canine mammary neoplasms are 42% of all canine tumors. A correct histopathological diagnosis is useful in the prognosis and therapeutic strategies to follow. It has been shown that the prognosis is correlated with the level of differentiation. Malignant tumors with the best prognosis are complex adenocarcinomas that are highly differentiated glandular structure but the tumor with disorganized heterogeneous tissue are much more malignant, as anaplastic tumor with great tendency to invade lymphatic and blood vessels(8). In Human Medicine the tumor markers allow us to understand the biology of mammary cancer prognostic and predictive of response to therapy. These over-expression of the proto-oncogene Her2-neu that is associated with increased rates of proliferation, aggressive behaviors, hormonal independence and, in some studies, increased resistance to certain chemotherapeutic agents out. The prognostic factor evaluation and the incorporation of the studies of the canine patients with mammary tumors   will allow to adapt the therapy to use in each case. It will allow to increase the global survival, treatment response evaluation, illness progression looking for the best quality of life.

Key words: prognostic factors, oncogene Her2-neu, canine mammary cancer.

1Cátedra  Patología Clínica y Enfermedades Médicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA. Chorroarín 280. C 1427. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
Proyecto subsidiado por  UBACyT  (
20720130100012BA)
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Programa de Concurrencias en Investigación FCV-UBA, Secretaría de Ciencia y Técnica.
mprereira@fvet.uba.ar

Introducción
El cáncer de mama representa en caninos el 42% de todos los tumores en esa especie. Un correcto diagnóstico histopatológico es de utilidad para evaluar pronóstico y plantear estrategias terapéuticas a seguir. La clasificación de la OMS sigue el proceso de desdiferenciación, comenzando por los tumores malignos que más se asemejan a la estructura normal de la glándula mamaria y finalizando con los tumores poco diferenciados que no presentan estructura glandular. El modelo de tumor mamario canino sostiene la idea de la progresión neoplásica continua desde las lesiones preneoplásicas hasta carcinomas plenamente invasivos, como también se describe en el cáncer mamario humano. Se ha demostrado que el pronóstico está estrechamente correlacionado con el nivel de diferenciación. Los tumores malignos con mejor pronóstico son los adenocarcinomas complejos que presentan una estructura glandular altamente diferenciada con epitelio secretor que contenga alvéolos, túbulos y mioepitelio. Estos tumores raramente metastatizan y mediante una escisión completa su pronóstico es generalmente favorable(10).  Si no existen células mioepiteliales, los tumores se denominan adenocarcinomas simples y se dividen en adenocarcinomas alvelolares, tubulares, túbuloalveolares, papilares o papilares-quísticos. Estos tumores son invasivos y pueden diseminarse a distancia(6-10). Si esto ha sucedido, a pesar de la eliminación quirúrgica, el pronóstico sigue siendo desfavorable. Cuando  el tumor carece de estructuras luminares, se denomina carcinoma sólido. Es el más invasivo y tiende a metastatizar pronto. El pronóstico es más reservado.  Las neoplasias menos diferenciadas con aspecto de tejido heterogéneo desorganizado son los más malignos y  se conocen como anaplásicos con gran tendencia a invadir vasos linfáticos y sanguíneos. La invasión de vasos linfáticos cutáneos hace que la piel aparezca inflamada; dando el término clínico descriptivo de adenocarcinoma inflamatorio(5). El pronóstico para estos pacientes es siempre desfavorable, aún con cirugía radical. A veces se observa el carcinoma de células escamosas en la glándula mamaria con pronóstico grave y frecuente metástasis temprana a los ganglios linfáticos regionales. En relación a los sarcomas la incidencia varía entre los diferentes estudios, pero habitualmente es del 5-10 %. La mayoría son ósteosarcomas extraesqueleticos primarios y fibrosarcomas. Siempre tienen un pronóstico desfavorable y el 75 % de ellos metastatizan, sobre todo por vía hemática(9).

En Medicina Humana en la última década se han producido grandes avances, desarrollando nuevas técnicas de investigación y se han descubierto un gran número de macromoléculas importantes en los procesos biológicos. El uso de  anticuerpos monoclonales permite su detección en cortes tisulares por técnicas inmunohistoquímicas al mismo tiempo que permite evaluar a la misma célula en el contexto del tejido comprometido. Entre éstos se destaca la sobre-expresión del proto-oncogen Her2-neu. El mismo codifica una glucoproteína que actúa como receptora de membrana celular y capta las señales de proliferación, específicamente, al factor de crecimiento epitelial. Las neoplasias con pronóstico desfavorable sobreexpresan el oncogen Her2-neu vinculado al desarrollo tumoral. En el cáncer de mama, una fracción de las pacientes sobreexpresan al Her2-neu como parte del proceso de malignización(3-7).

La sobreexpresión de Her2-neu implica un pobre pronóstico, debido a que señala un alto nivel de proliferación celular, un peor grado histológico, una mayor agresividad biológica, una menor sobrevida total y un mayor riesgo de metástasis. En Medicina Humana se ha detectado que aproximadamente de un 20 a un 30% de los cánceres de mama tienen amplificado y/o sobreexpresado este proto-oncogén(11).  El interés de su determinación radica principalmente en la posibilidad de aplicar inmunoterapia dirigida contra Her2-neu, mediante el anticuerpo monoclonal trastuzumab conjuntamente con quimioterapia(9). En Medicina Veterinaria la expresión de Her2-neu fue correlacionada con un elevado índice mitótico lo que lleva a una rápida progresión y mal pronóstico, pobre respuesta a la quimioterapia, corta sobrevida global y mala calidad de vida(1-4). También se ha demostrado que juega un importante papel en la carcinogénesis de la glándula mamaria canina y que no se expresa en glándulas mamarias normales mientras que si es expresado en tumores mamarios benignos y malignos(11). El objetivo del presente trabajo es  investigar la expresión del oncogén Her2-neu en cáncer mamario canino, su relación con el diagnóstico histopatológico y la sobrevida global asociada(2).

Materiales y métodos
Se trabajó con 46 muestras de tejido neoplásico mamario canino, provenientes del Servicio de Histopatología de la Facultad de Medicina Veterinaria-UBA. El tipo tumoral (benigno/maligno) se evaluó con las muestras fijadas en formalina bufferada al 10% y  procesadas por el método histológico convencional, teñidas con Hematoxilina-Eosina. Para inmunohistoquímica las secciones de tejido fueron desparafinadas y sometidas a rehidratación y recuperación antigénica para luego ser incubadas con el anticuerpo monoclonal de ratón anti-Her2-neu (c-erbB-2) (clon CB-11), Cell Marque, Rockling, CA, USA. Para evaluar la inmunomarcación las muestras fueron estudiadas simultáneamente por dos observadores, primero a bajo aumento (×40) y luego, para el recuento de  células con tinción positiva, a gran aumento (x400) (foto Nº1y2). Se evaluaron 3000 células tumorales y  los resultados se interpretaron según la tabla N°1:

FORO UNO

Foto 1.

Foto 1.

Foto 2.

Foto 2.

Se determinó la prevalencia según el tumor (benigno/maligno). Para  evaluar  sobrevida  global  se  empleó como método estadístico el análisis de supervivencia de Kaplan Meier. La comparación entre ellos se realizó mediante el Test de Logrunk y Cox-Mantel, considerándose  significativos  los  p menores o iguales a 0,05.

Resultados
Del total (n=46) de muestras histopatológicas de tumores mamarios resultaron malignos (n=39/46 84,78%) y benignos (n=7/46 15,22%). Dentro del grupo de pacientes con tumores malignos (n=39) presentaron expresión positiva para Herb2-neu (n=21/39 53,9%, 2+ n=6 15,4%, 3+ n=15  38,5%) y expresión negativa (n=18 46,1%, 0 n=4 10,2%, 1+ n=14 35,9%). Dentro del grupo de pacientes con tumores benignos (n=7) todos fueron negativos para la expresión de Herb2-neu. En el grupo de pacientes con tumores mamarios malignos se observaron diferencias significativas en cuanto a la expresión 0, 1, 2 y 3 de Herb2-neu con una mediana se supervivencia de 870, 1092, 230 y 100 respectivamente. El grupo con escala 0-1, la cual se interpreta como negativa para la expresión de Herb2-neu (Tabla N°1), mostró mejor pronóstico y mayor sobrevida global que el grupo de pacientes con escala 2-3 que se interpreta como positiva. (Gráfico N°1)

En cuanto al tipo histopatológico y su relación con la expresión de Herb2-neu se observó en los adenocarcinomas simples (n=24, expresión positiva n=14  58,3%  expresión negativos n=10 41,7%), en los adenocarcinomas compuestos (n=11, expresión positiva n=4 36,4% expresión negativos n=7  63,6%), en los carcinomas de células escamosas (n=2, expresión positiva n=2 100%) y tumores mixtos malignos (n=2, expresión positiva n=2 100%).

 

Gráfico Nº 1

Gráfico Nº 1

Conclusiones

Se observó que el 53,9% de los pacientes con tumores mamarios malignos presentaron amplificado y/o sobreexpresado el proto-oncogén Herb2-neu en un porcentaje mayor que el reportado por la bibliografía consultada.   Por otro lado y acorde a ella se observó, en relación al tipo histopatológico, que un 58,3% de los adenocarcinomas simples, un 36,4% de los adenocarcinomas compuestos y el 100% de los tumores mixtos malignos y carcinomas de células escamosas, presentaron sobreexpresión del oncogén. Estos tumores resultaron ser  invasivos y con posibilidad de diseminarse a distancia con una rápida progresión de la enfermedad, pobre respuesta a la quimioterapia, corta sobrevida global y mala calidad de vida.

La evaluación del herb2-neu y su posterior incorporación a los estudios de rutina realizados a los pacientes caninos con cáncer mamario permitirá adecuar la terapéutica a emplear en cada caso tendiendo a incrementar la sobrevida global, permitirá el seguimiento de la reacción al tratamiento y  la objetivación de la progresión de la enfermedad tendiendo a una mejor calidad de vida.

Bibliografía

1- AKSU, G.; DUMN, C.; GURBUZ, Y. et al.: Correlation between c-erbB2 expression, lymphovascular invasion and other biological and clinical prognostic factors and preoperative tumor markers in patients with early-stage and locally advanced breast cancer. J BUON, 16, 52-7, 2011.

2- ANDREA, G.K.; MARKO, H., BRANKA, A. et al.: Histopathological evaluation and immunohistochemical study of estrogen receptor α, HER-2 and Ki-67 in canine neoplastic mammary lesions. Veternarski arhiv. 81(6), 709-722, 2011.

3- BAQARIA, S.P.; RAY, P.S.; WANG J., et  al.:  Prognostic value of basal phenotype in HER-2-overexpressing breast cancer. Ann Surg Oncol, 19, 935-40, 2012.

4- DUTRA, A.P., et al.: Assessment of cellular proliferation and prognostic factors in canine mammary gland tumors. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., 60:1403-12, 2008.

5- FERREIRA, E.; BERTAGNOLLI, A.C.; CAVALCANTI, M.F.; SCHMITT, F.C.; CASSALI, G.D. The relationship between tumour size and expression of prognostic markers in benign and malignant canine mammary tumours. Vet Comp Oncol;7(4):230-5, 2009.

6- GOLDSCHMIDT, M.; PEÑA, L.; RASOTTO, R.; ZAPPULLI, V. Classification and grading of canine mammary tumors. Vet Pathol.;48(1):117-31. doi: 10.1177/0300985810393258, 2011.

7- MUHAMMADNEJAD, A.; KEYHANI, E., et al.: Overexpression of her-2/neu in malignant mammary tumors; translation of clinicopathological features from dog to human.  Asian Pac J Cancer Prev. 13(12), 6415-21, 2012.

8- PEÑA L, GAMA A, GOLDSCHMIDT MH, ABADIE J, BENAZZI, et al: Canine mammary tumors: a review and consensus of standard guidelines on epithelial and myoepithelial phenotype markers, HER2, and hormone receptor assessment using immunohistochemistry. Vet Pathol., 51(1):127-45, doi: 10.1177/0300985813509388, 2014.

9- RASOTTO, R.; ZAPPULLI, V.; CASTAGNARO, M.; GOLDSCHMIDT, M.H. A retrospective study of those histopathologic parameters predictive of invasion of the lymphatic system by canine mammary carcinomas. Vet Pathol.; 49(2):330-40. doi: 10.1177/0300985811409253, 2012.

10- SORENMO, K.U.; KRISTIANSEN, V.M.; COFONE, M.A. et al.: Canine mammary gland tumours; a histological continuum from benign to malignant; clinical and histopathological evidence. Veterinary and Comparative Oncology 7(3), 162–172. 2009.

11- VINOTHINI, G.; BALACHANDRAN, C.; NAGINI, S.: Evaluation of molecular markers in canine mammary tumors: Correlation with histological grading.  Oncology Research Featuring Preclinical and Clinical Cancer Therapeutics. 18(5-6), 193-201, 2009.